发布时间：2020-03-21所属分类：医学论文浏览：1次
摘 要： [摘要]目的建立HPLC测定人血浆中盐酸氨溴索含量的方法。方法选用DiamonsilC柱(200mnlx4.6inm，5m)，流动相：甲醇一0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)一四氢呋喃(700：320：25，v/v/v)，流速：1.2ml/min，检测波长：242nnl，柱温：室温。结果该方法低、中、高3种
[摘要]目的建立HPLC测定人血浆中盐酸氨溴索含量的方法。方法选用Diamonsil—C柱(200mnlx4.6inm，5m)，流动相：甲醇一0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)一四氢呋喃(700：320：25，v/v/v)，流速：1.2ml/min，检测波长：242nnl，柱温：室温。结果该方法低、中、高3种浓度的提取回收率为88.2%～104.8%，日内、日间相对标准差为2.7%～5.3%(n=6)，在l0.2～610.8ng/ml范围内线性关系良好。结论本法简便、灵敏、专属性强，能满足含量测定及体内药代动力学研究的需要。
[关键词]盐酸氨溴索;高效液相色谱;血药浓度
氨溴索为溴己新的活性代谢产物，能促进肺表面活性物质的分泌及气道液体分泌，促进黏痰溶解，显著降低痰黏度，增强支气管黏膜纤毛运动，促进痰液排除，改善通气功能和呼吸困难状况，主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困难等。本研究参考相关文献，建立了测定盐酸氨溴索血药浓度的高效液相色谱方法。采用该方法以上海勃林格殷格翰药业有限公司生产的盐酸氨溴索片(商品名：沐舒坦@)为参比制剂，研究上海衡山药业有限公司生产的盐酸氨溴索片的人体生物等效性。。
1材料
1.1仪器LC一10ATVP型高效液相色谱，包括SPD.10AVP紫外检测器，色谱工作站(日本岛津公司);TDZ4台式自动平衡离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司);XW一80A微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司);FA1004电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)。
1.2药品与试剂受试制剂：盐酸氨溴索片(上海衡山药业有限公司，规格：每片30mg，批号：080301);参比制剂：盐酸氨溴索片(上海勃林格殷格翰药业有限公司，规格：每片30mg，批号：784079);盐酸氨溴索对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100599—200502，纯度：99.4%);内标：酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100294—199801);甲醇、四氢呋喃为色谱纯，磷酸等均为分析纯。
2方法与结果
2.1样品处理精密量取血浆500Ixl置于离心管中，加入内标溶液(2.0420Ixg/m1)100txl，甲醇一水(1：1，v/v)1001xl，再分别加入0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH10.0)0.5ml和乙醚4.0ml，封口后振荡1min，涡旋混合60s，离心6min(3500rpm)，醚层转至另一离心管中，加入0.01mol/L盐酸200txl，涡旋混匀60s，离心6min(3500r/min)，弃去醚层，酸层取501进样分析。
2.2试验条件色谱柱：Diamonsil—C.8柱(200mm×4.6mill，5m);流动相：甲醇一0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)一四氢呋喃(700：320：25，v/v/v);流速：1.2ml/min;柱温：室温;进样量：50txl;检测波长：242nm。
2.3盐酸氨溴索对照品溶液的配制精密称取盐酸氨溴索对照品10.18mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为101.8m1的盐酸氨溴索储备液。
2.4内标溶液的配制精密称取酮康唑对照品10.21mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10.21mg/ml的内标储备液;精密量取1.0ml内标储备液置50m1量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0420Ixg/ml的内标溶液。以上均需避光操作。
2.5专属性试验在“2.2”项分析测试条件下，血浆中氨溴索和内标酮康唑的保留时间分别为9.9min和11.7rain，血浆中内源性物质不干扰盐酸氨溴索和内标物酮康唑的测定。色谱见图1。
2.6线性范围及定量下限精密量取空白血浆500l，分别精密加入盐酸氨溴索系列标准溶液100txl，配制成血浆中盐酸氨溴索浓度为10.2、20.4、50.9、152.7、305.4、509.0、6l0.8ng/ml的血浆样品，按“2.1”项下同法操作，并进行色谱分析。以盐酸氨溴索与内标的峰面积比对盐酸氨溴索浓度进行线性回归，结果表明，盐酸氨溴索在10.2～610.8ng/ml范围内与待测物和内标物峰面积之比线性关系良好，定量下限为10.2ng/ml。用加权(W=1/X)最小二乘法进行回归运算，得回归方程为：Y=0.00203×+0.00082.r=0.9985
2.7精密度与准确度精密量取空白血浆500Ixl，分别精密加入不同浓度的盐酸氨溴索标准溶液100l，配制成血浆中盐酸氨溴索浓度为20.4、l52.7和509.0ng/ml的血浆样品(每个浓度6份样本分析)，按“2.1”项下同法操作，连续测定3批(与标准曲线同时进行)，计算血浆样品的浓度，求得方法的准确度与精密度。日内精密度RSD分别为2.7%，5.3%，2.0%;日间精密度RSD分别为5.1%，4.4%，1.2%。
2.8提取回收率精密量取空白血浆500l，分别精密加入不同浓度的盐酸氨溴索标准溶液1001，配制成血浆中盐酸氨溴索浓度为20.4、152.7和509.0ng/ml的血浆样品(每个浓度3份样本分析)，按“血浆样品处理方法”项下同法试验，获得相应色谱峰面积;另取对应浓度的盐酸氨溴索标准溶液各100l，加入酮康唑内标溶液100l，配制成与血浆样品处理后浓度一致的体外样品，取501进样分析，获得相应色谱峰面积(3次测定的平均值)。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。详见表1。
2.9稳定性考察用空白血浆配制血浆标准样品各3份，按“2.1”项方法及“2.2”项条件进行处理和分析，考察血浆样品预处理后室温放置24h、3次冻融循环的稳定性，一70。c14d冷冻条件下及储备液的稳定性，平均RSD值均<10%。结果表明，血浆标准样品及储备液在上述条件下稳定性良好。
2.10应用20例健康男性自愿者，年龄(23.3±1.9)岁，体重(61.8±5.5)kg，身高(1.7l±0.05)1TI。试验前，所有志愿者经血压、心电图、胸透、血常规、尿常规、肝肾功能检查正常，充分了解试验内容后均自愿签署知情同意书。受试者随机分为2组，禁食10h后，于次日晨空腹口服参比制剂或受试制剂90mg。给药前采血1次，给药后的0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、l2.0、24.0h取静脉血5ml，置肝素化试管中，离心，分离血浆。按“2.1”项下方法操作，测定血浆中盐酸氨溴索的浓度，平均药时曲线见图2，主要药代动力学参数见表2。
3讨论
盐酸氨溴索体内浓度低，本测定采用液一液萃取的方法用乙醚提取血浆样品，再用0.01mol/[盐酸反提回水相，可以减少人血浆内源性杂质的干扰。因样品吸附作用很强，在试验中易造成峰拖尾，出峰时间长，故于流动相中加入四氢呋喃以改善峰形，减少出峰时间。本方法灵敏，专属性强，能满足盐酸氨溴索的含量测定及体内药动学研究的需要。
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