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UPLC波长变换测定地榆饮片中没食子酸、鞣花酸含量

发布时间:2020-01-07所属分类:农业论文浏览:1

摘 要: 摘要:目的建立UPLC波长变换测定地榆中没食子酸和鞣花酸的方法,并对游离和水解样品中的成分进行分析。方法采用UPLC法,色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mm50mm,1.7m),流动相为乙腈-0.1%磷酸,进行梯度洗脱。结果没食子酸和鞣花酸的平均回收率分别为97.9%和

  摘要:目的建立UPLC波长变换测定地榆中没食子酸和鞣花酸的方法,并对游离和水解样品中的成分进行分析。方法采用UPLC法,色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,进行梯度洗脱。结果没食子酸和鞣花酸的平均回收率分别为97.9%和99.8%,RSD分别2.1%和1.6%(n=6)。结论所建立的方法稳定、准确、可靠,游离没食子酸和鞣花酸更适合作为地榆饮片的质量控制指标。

UPLC波长变换测定地榆饮片中没食子酸、鞣花酸含量

  关键词:地榆;没食子酸;鞣花酸;超高效液相色谱

  地榆为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficnalisL.或长叶地榆SanguisorbaofficinalisL.var.longifolia(Bert.)YuetLi的干燥根[1]。地榆始载于《神农本草经》,列为中品,其味苦、酸、涩,性微寒。归肝、大肠经。具有凉血止血,解毒敛疮的功效,用于治疗便血,痔血,血痢,崩漏,水火烫伤,痈肿疮毒等[1,2]。地榆主要化学成分为鞣质和三萜类化合物,此外还有黄酮类、蒽醌类化合物[3,4]。

  一般认为鞣质是地榆止血作用的主要活性成分[5],但是实验表明口服给予实验动物大分子的单宁酸,止血作用较差;而没食子酸和鞣花酸具有较好的止血活性[6,7],故小分子的鞣质类成分是与其止血功效密切相关的物质基础。因此建立地榆中游离没食子酸和鞣花酸的含量测定方法,为优选更合理的地榆质控指标提供依据。

  1仪器与试药

  1.1仪器WatersH-classUPLC全自动高效液相色谱仪(含PDA检测器);XS205D1/10万电子天平(梅特勒托利多);LC-350A型超声波中药处理机(济宁市中区鲁超仪器厂)。

  1.2试药没食子酸对照品(批号:110831-201302)购自中国药品生物制品检定所、鞣花酸对照品(批号10149850)购于美国阿法埃莎(AlfaAesar);乙腈(色谱纯)购于美国默克,磷酸(色谱纯)购于天津科密欧化学试剂有限公司,甲醇(分析纯)购于天津富宇精细化工有限公司。屈臣氏蒸馏水。

  药材:市售地榆饮片,经本院中药资源研究室林慧彬研究员鉴定为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.的干燥根。

  2方法与结果

  2.1色谱条件色谱柱:ACQUITYUPLCBEHC18柱(1.7μm,2.1mm×50mm);流动相:A乙腈,B为0.1%磷酸水(0~0.7min,A1.5%→4%;0.7~1.7min,A4%→30%;1.7~3.5min,A30%→40%,3.5~5min,A40%→50%)。流速:0.6ml·min-1;柱温35℃。波长:270nm/252nm。进样量:0.5μl。在上述色谱条件下,没食子酸、鞣花酸对照品和供试品的色谱图见图1、图2。

  2.2溶液制备

  2.2.1对照品溶液的制备分别精密称取没食子酸、鞣花酸对照品适量,加甲醇溶解,制成每毫升含没食子酸0.10mg,鞣花酸0.45mg的溶液,即得。

  2.2.2供试品溶液的制备称取地榆粉末(过4号筛)约0.2g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理40min,放凉,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液,即得。

  2.3线性关系考察分别吸取不同体积的没食子酸对照品溶液,注入高效液相色谱中,测定,以对照品进样质量(μg)为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制出校正曲线,Y=5078154X-2979.6,相关系数R2=0.9999。结果表明,没食子酸进样量在0.0198~0.2376μg范围内具有良好的线性关系。

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  分别吸取不同体积鞣花酸对照品溶液,注入高效液相色谱中,测定,以对照品进样质量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制出校正曲线,Y=9175392X+9142.6,相关系数R2=0.9997。结果表明,鞣花酸进样量在0.0123~0.1848μg范围内具有良好的线性关系。

  2.4精密度试验按“2.1”项下色谱条件,将没食子酸和鞣花酸对照品溶液重复进样6次,每次0.5μl,测定没食子酸的峰面积RSD为0.77%,鞣花酸的峰面积RSD为0.39%,表明精密度良好。

  2.5稳定性试验按“2.1”项下色谱条件,取供试品溶液,室温条件下,分别在0,2,4,6,8,10,12,24h进样并进行分析,测定峰面积。结果没食子酸在24h内峰面积RSD为0.92%,鞣花酸在24h内峰面积RSD为0.84%,表明该供试品溶液至少在24h内稳定。

  2.6重复性试验精密称取同一批次的地榆样品粉末6份,按“2.2.2”项下制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件精密吸取一定量的样品溶液注入液相色谱仪,依法测定,计算没食子酸和鞣花酸含量。结果没食子酸和鞣花酸的含量分别为0.66%和0.89%,RSD分别为2.22%和2.17%,表明方法重复性良好。

  2.7加样回收率精密称取已知含量的地榆样品6份,分别加入没食子酸和鞣花酸对照品溶液适量,按“2.2.2”项下制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件,测定峰面积,计算没食子酸和鞣花酸的平均加样回收率,结果见表1,表2。

  2.8样品测定称取地榆样品粉末,按“2.2.2”项下制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件,测定峰面积并计算各样品中游离没食子酸和鞣花酸的含量,见表3。

  称取地榆样品粉末,按照《中国药典》2015年版地榆项下没食子酸含量测定方法,制备药典法供试品溶液,按照,按“2.1”项下色谱条件,测定峰面积并计算各样品中水解没食子酸和鞣花酸的含量,见表3。

  10批不同产地地榆饮片中,没食子酸含量在0.07%~0.96%之间,鞣花酸含量在0.36%~1.28%之间;水解后没食子酸含量在0.39%~4.65%之间,鞣花酸含量在0.09%~0.49%之间。

  3结论

  《中国药典》2015年版地榆项下收载了没食子酸的含量测定,其提取方法是以10%的盐酸水解3h后,测定其水解产物中的没食子酸含量,而本文所采用的提取方法是甲醇超声提取,具有用时短,操作简便的优点。由测定结果可知,药典法制备的样品中没食子酸含量高于本文所建立的方法,原因是地榆中含有大量没食子鞣质,在盐酸的作用下,发生水解成了没食子酸,使其含量升高;同时鞣花酸含量却显著降低,原因是鞣花酸的结构中含有酯键,在酸水加热的条件下发生水解从而引起结构的变化。

  采用UPLC法测定地榆中的没食子酸和鞣花酸,最短可在3.5min内完成一次测定,大大节约了时间;通过波长变换的方法,可分别在没食子酸和鞣花酸的最大吸收波长270nm和252nm进行测定,提高测定的准确度。

  采用SPSS软件对两组数据进行正态分布检验,K-S结果sig.=0.2>0.05,均服从正态分布。10批不同产地地榆饮片游离没食子酸平均含量为0.457%±0.298%,鞣花酸平均含量为0.763%±0.356%,离散度均较大,不同产地地榆游离没食子酸含量相差极大,最高者是最低者的10倍以上,而鞣花酸含量相差3倍左右,表明各地产的地榆质量有较大差异。

  一般认为鞣质是地榆止血作用的主要活性成分[5],但是实验表明口服给予实验动物大分子的单宁酸,止血作用较差;而没食子酸和鞣花酸具有较好的止血活性[6,7],故小分子的鞣质类成分是与其止血功效密切相关的物质基础。因此建立地榆中游离没食子酸和鞣花酸的含量测定方法,制定合理的含量限度对于提升地榆质控指标具有重要意义。将地榆饮片游离没食子酸和鞣花酸平均值下浮20%,分别为0.366%和0.610%,若作为其含量限度,10批地榆饮片中,2号、6号、7号、8号共四批样品含量低于没食子酸限度,2号、5号、6号、7号、8号共五批样品地榆鞣花酸限度,因此在进一步实验中,应扩大样品量,为制定更合理的地榆质控标准提供数据支撑。

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