高效液相色谱法测定益气止渴丸中梓醇的含量

发布时间：2020-01-17所属分类：医学职称论文浏览：1次

摘 要： 摘要：目的建立测定益气止渴丸中梓醇含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Apollo-C18柱，流动相为乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)，流速为0.9mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，进样量为10L。结果梓醇的检测浓度在2.014-20.14g/mL范围内

　　摘要：目的建立测定益气止渴丸中梓醇含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Apollo-C18柱，流动相为乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)，流速为0.9mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，进样量为10μL。结果梓醇的检测浓度在2.014-20.14μg/mL范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9994)，平均加样回收率为98.6%，RSD=1.93(n=6)。结论该检验方法简便、专属、准确、重复性好，可以用于益气止渴丸中梓醇的含量测定。

　　关键词：益气止渴丸;梓醇;高效液相色谱法;含量测定

　　0　引言

　　益气止渴丸是吉林省长春市内某医疗机构内部研发的，车间生产的中药品种，是复方制剂。由地黄、天花粉、葛根、麦冬、甘草等七味中药组方而成。具有益气生津，润燥养阴，培本降糖的功效。主要用于II型糖尿病之多饮、多食、多尿，消瘦乏力、视物昏花、肢体麻木疼痛等病证。组方中重用地黄，为君药，而地黄的主要有效成分之一为梓醇，所以多数情况下都以梓醇作为地黄成方制剂的质量控制指标。因此，本实验采用反相高效液相色谱法测定益气止渴丸中梓醇的含量。

　　1　仪器与试药

　　LC-2030型HPLC仪，紫外检测器;METTLERTOLEDOAG135型电子天平：

　　益气止渴丸(为吉林省长春市内某医疗机构制剂室研发部门提供，规格：每瓶装60g，批号：20171001、20171002、20171003);梓醇对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110808-200306);乙腈(美国Fisher公司，色谱纯);甲醇(美国Fisher公司，色谱纯);水(市售娃哈哈纯净水)[1]。

　　2　方法与结果

　　2.1　色谱条件。色谱柱：CAPCELLPAK-C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相：乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V);流速：0.9mL/min;柱温：30℃;检测波长：210nm;进样量：10μL。在此色谱条件下，梓醇与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，理论板数按梓醇峰计算为5000。

　　2.2　溶液的制备

　　2.2.1　对照品溶液的制备：取梓醇对照品适量，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL中含梓醇0.2014mg的溶液，即得。

　　2.2.2　供试品溶液的制备：取益气止渴丸适量，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，置水浴上加热回流1.5h，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.2.3　阴性对照溶液的制备：按益气止渴丸处方配比及制备工艺，取除处方中地黄外的其它药材，按照益气止渴丸的制备工艺制备，制成无地黄的阴性样品粉末，再按“2.2.2”项供试品溶液制备的处理方法制备阴性对照溶液，结果表明空白对照溶液在梓醇出峰时间处无干扰，选择的方法具有合理性。取上述三种溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入高效液相色谱仪，色谱图见图1。

　　2.3　线性关系考察。精密称取梓醇对照品10.07mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述梓醇对照品溶液各1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，置100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10μL注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件进行分析。以峰面积积分值为纵坐标(y)，质量浓度为横坐标(x，μg/mL)绘制标准曲线，得到回归方程y=1505.4x+190.99(r=0.9994)。结果表明，梓醇检测浓度在2.014-20.14μg/mL范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。

　　2.4　精密度试验。取同一份按照“2.2.1”项下制备的梓醇对照品溶液(浓度为0.2104mg/mL)适量，按照“2.1”项下色谱条件进行分析，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。

　　2.5　稳定性试验。取同一份按照“2.2.2”项下制备的供试品溶液适量，分别放置0、2、4、6、8、10、12、24h后按照“2.1”项下色谱条件进行分析，进样量10μL，结果见表2。

　　结果，平均：222902，RSD=1.4%，表明供试品溶液在24h内稳定。

　　2.6　重复性试验。精密称取同一供试品(批号：20171002)适量，按照“2.2.2”项下制备的供试品溶液方法平行制备5份供试品溶液，依照“2.1”项下色谱条件测定，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果，供试品中梓醇含量的RSD=1.3%，表明本方法的重复性较好。

　　2.7　加样回收率试验。取已测含量的益气止渴丸适量(批号：20171003)，共6份，研细，取1.5g，精密称定，分别精密加入梓醇对照品溶液(浓度为0.2014mg/mL)10.0mL，按照“2.2.2”项下方法制备的供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件测定，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定并计算回收率，结果见表3

　　2.8　样品含量测定。取上述3批样品适量，按照“2.2.2”项下的供试品溶液制备方法进行配制，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪[2]。另取梓醇对照品溶液(浓度为0.2014mg/mL)适量，依据“2.1”项下色谱条件测定，进样量10μL，按外标法以峰面积计算供试品中梓醇的含量。20171001含量为1.3621mg/g;20171002含量为1.4234mg/g;20171003含量为1.3928mg/g。

　　3　讨论

　　中药是我国的国粹，数千年的应用历史，为我国留下了辉煌灿烂的中药文化。近年来，人们越来越关注中药的使用，患者越来越多的开始服用中药产品。中药对于减轻病人的症状和痛苦，提高生存质量，延长生命，有重要的意义。中药治疗还有五大特点，①具有较强的整体观念;②可以弥补手术治疗、放射治疗、化学治疗的不足;③不影响劳动力;④副作用小;⑤经济。益气止渴丸是吉林省地方医院临床上应用较多的中成药，对于治疗II型糖尿病疗效比较显著，受到很多患者的青睐。本研究建立了一种简便、快捷、可靠的分析方法，为益气止渴丸的质量控制提供了理论依据[3]。

　　相关期刊推荐：《世界最新医学信息文摘》(周二刊)2001年创刊，系中国医师协会主办国家级期刊。本刊制作精美、编审严谨，以纸质导读附带光盘的形式面向全国出版，实现了传统纸版、光盘版、网络版的有机结合。本刊特有的经典医学视频、动态影像诊断、病例讨论实况、精品课件等栏目大大提升了医学学术期刊的传播效率，2001年由国家新闻出版总署批准的第一本医学类电子期刊，为中国首家医学多媒体国家级综合性医学学术刊。

　　3.1　色谱条件的优化。由于梓醇在210nm的波长处出现最大吸收峰，所以选择210nm作为检测波长。此波长接近甲醇的末端吸收，因此试验选择了乙腈作为有机溶剂。考察了两种流动相：乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)和乙腈-水(0.9:99.1，V/V)，结果从色谱图上看出前者的分离效果更好。

　　3.2　提取溶剂的选择。考察了加热回流提取方法和冷浸法、超声处理方法，并且考察不同溶剂(水、甲醇、乙醇)提取，提取时间(30分、40分、50分、1h)，提取溶剂的体积(25mL、50mL、100mL)，结果表明，最优化的提取方法是甲醇溶剂25mL加热回流提取1.5h。