发布时间：2020-04-11所属分类：医学论文浏览：1次
摘 要： 摘要：目的探讨urocortin(UCN)对胃肠功能和血浆ghrelin水平的影响及参与介导的受体。方法运用免疫荧光法和ELISA法，观察8周龄SD雄性大鼠侧脑室单纯注射UCN或同时注射UCN和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)受体拮抗剂后，大鼠摄食量、胃排空速度、血浆酰化和非
摘要：目的探讨urocortin(UCN)对胃肠功能和血浆ghrelin水平的影响及参与介导的受体。方法运用免疫荧光法和ELISA法，观察8周龄SD雄性大鼠侧脑室单纯注射UCN或同时注射UCN和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)受体拮抗剂后，大鼠摄食量、胃排空速度、血浆酰化和非酰化ghrelin水平的变化。结果①侧脑室注射UCN后，观察的各项指标均显著降低(P<0.05)。②侧脑室同时注射UCN+CRF.1型受体拮抗剂，各项指标与单纯注射UCN相比，无明显差异(P>0.05);侧脑室同时注射UCN+CRF-2型受体拈抗剂，各项指标与单纯注射UCN相比，均有明显增加(P<0.05)。结论推测UCN经侧脑室注射后能与CRF一2型受体结合，从而抑制胃肠功能并降低血浆酰化和非酰化ghrelin水平。
关键词：urocortin;ghrelin;胃肠功能;促肾上腺皮质激素释放因子受体
随着工作与生活节奏的加快以及竞争的日趋激烈，人们的生活压力越来越大。压力事件会引发机体的应激反应，并会导致厌食症、功能性消化不良、肠易激综合征等，但机制尚未明确。
相关期刊推荐：《山西医科大学学报》Journal of Shanxi Medical University(月刊)曾用刊名：山西医学院学报，1959年创刊，医学类综合性学术刊物，主要刊登基础医学、预防医学、临床医学方面的科研成果及工作经验。
Urocortin(UCN)系促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)家族的一员，与CRF一1型受体和CRF-2型受体都能结合，且与CRF-2型受体的结合能力更高…。研究表明，urocortin与应激反应有关，并会导致抑郁、行为减少、食欲降低、摄食抑制等，但机制尚未明确J。
Ghrelin是由28个氨基酸组成的肽类激素，主要由胃黏膜泌酸腺X/A样细胞分泌，其活性形式——酰化ghrelin可以使食欲增强、胃肠运动加快、胃酸分泌增多J。研究表明，自主神经系统和与应激反应有关的激素都会影响血浆酰化ghrelin的水平。
本研究旨在通过研究侧脑室注射UCN对血浆ghrelin水平和胃肠功能的影响及参与介导的受体，来探讨压力事件导致食欲降低、摄食抑制、胃肠功能失调的可能性原因。
1材料和方法
1.1动物和材料8周龄SD雄性大鼠96只，体重210—230g，自由摄食、饮水，动物房温度维持在(22±2)cC，光暗周期为12h：12h。UCN购自日本PeptideInstitute，CRF.1型受体和CRF.2型受体购自日本WakoPureChemicalIndustries。UCN，CRF一1，2型受体拮抗剂均以PBS(pH6.9)为溶剂。
1.2分组和方法
1.2.1分组在观察摄食量、胃排空速度、血浆酰化和非酰化ghrelin水平这三项实验中，每项实验均随机选取4组大鼠(n=8)，大鼠分别侧脑室注射PBS(pH6.9)、UCN(0.3nmol/101)、UCN(0.3nmol/51)十CRF.1型受体拮抗剂(12nmo~5tx1)的混合液、UCN(0.3nmo~5Ix1)+CRF-2型受体拮抗剂(2nmoV51)的混合液。每只大鼠注射试剂总量均为10LL1。
1.2.2动物模型随机挑选正常大鼠进行实验。将动物腹膜腔内注射戊巴比妥钠麻醉后，在大鼠脑立体定位仪上固定，使前后囟处于同一水平面上L5]。沿颅顶正中剪开头皮暴露颅骨，确定侧脑室位置。在颅骨相应部位开一小孔，将不锈钢套管置于脑室内。将套管固定于颅骨上，并用一不锈钢管芯针插入套管内，防止套管堵塞。手术后大鼠单笼饲养，至少恢复5d。恢复期间，尽量减少压力、静脉注射等刺激。试验前禁食24h。
1.2.3大鼠摄食量的测定侧脑室注射后，给每组大鼠提供等量食物，并在1，2，4，6h后记录每只大鼠的摄食量，取平均值。
1.2.4大鼠胃排空速度的测定将荧光素FD70标记的右旋糖酐(每鼠12.5mg荧光素FD70/0.5ml右旋糖酐)作为不被消化道吸收的标记物。侧脑室注射30min后让大鼠口服。口服30min后，无痛处死大鼠，立即摘除其胃部。在5mlPBS中收集FD70标记的胃内容物。用0.45Ixm的滤波器过滤上清液，使用UV.1200分光光度计在490nm和520nm的波长中测量吸光率。胃排空率(%)=(1一A/B)×100%，A代表残留在胃内的FD70数量，B代JShanxiMedUniv，Jul2012，Vol43No7表服用总剂量。
1.2.5血浆酰化和非酰化ghrelin水平的测定侧脑室注射后，无痛处死大鼠，从大鼠的眶静脉窦采集约4ml全血装入含有乙二胺四乙酸(5.0mg)和抑肽酶(2000klU)的EP管内。放置4cI=离心机中，10000×g离心3min并取上清，用1mol//LHC1酸化后放于一80c【=冰箱中储存待测。采用ELISA方法检测血浆中ghrelin。
1.3统计学分析将原始数据在Excel下建立数据库，应用SPSS11.5软件进行处理。采用两样本均数t检验，检验水准取=0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1UCN在CRF受体拮抗剂作用下对摄食量、胃排空的影响侧脑室注射UCN(0.3nmo~lO1)后，与PBS组相比，1，2，4，6h的累计摄食量均显著减少(P<0.05)，说明UCN能够抑制摄食。侧脑室同时注射UCN+CRF.1型受体拮抗剂后，1，2，4，6h的累计摄食量与单纯注射UCN组差异不大(P>0.05)，说明CRF.1型受体拮抗剂不能改善UCN导致的摄食量减少。侧脑室注射UCN+CRF一2型受体拮抗剂后，1，2，4，6h的累计摄食量与单纯注射UCN组相比明显增加(P<0.05，见表1)，说明CRF一2型受体拮抗剂能改善UCN导致的摄食量减少。
侧脑室注射UCN(O.3nmo~101)后，摄食后30min胃排空率与PBS组比较，显著下降(P<0.05)，说明UCN能够减慢胃排空速度。侧脑室同时注射UCN+CRF.1型受体拮抗剂后，摄食后30min胃排空率与单纯注射UCN组差异不大(P>0.05)，说明CRF一1型受体拮抗剂不能改善UCN导致的胃排空速度减慢。侧脑室注射UCN+CRF.2型受体拮抗剂后，摄食后30min胃排空率与单纯注射UCN组相比明显增加(P<0.05，见表2)，说明CRF一2型受体拮抗剂能改善UCN导致的胃排空速度减慢。.
2.2UCN在CRF受体拮抗剂作用下对血浆ghrelin水平影响侧脑室注射UCN(0.3nmol/101)1h后，血浆酰化和非酰化ghrelin水平均有显著降低，说明UCN能够降低血浆酰化和非酰化ghrelin水平。侧脑室同时注射UCN+CRF.1型受体拮抗剂后，血浆酰化和非酰化ghrelin水平与单纯注射UCN组差异不大，说明CRF.1型受体拮抗剂不能改善UCN导致的血浆酰化和非酰化ghrelin水平降低。侧脑室注射UCN+CRF-2型受体拮抗剂后，血浆酰化和非酰化ghrelin水平与单纯注射UCN组相比明显升高，说明CRF一2型受体拮抗剂能改善UCN导致的血浆酰化和非酰化ghrelin水平降低(P<0.05，见表3)。
3讨论
Ghrelin是由28个氨基酸组成的肽类激素，主要由胃黏膜泌酸腺X/A样细胞合成后分泌入血，在中枢神经系统等部位中也有少量的合成。胃切除术患者血浆ghrelin水平大大降低。大鼠X/A样细胞有两种类型：关闭型和开放型。其中有活性的酰化ghrelin由关闭型细胞分泌，无活性的非酰化ghrelin两种细胞均可分泌。酰化ghrelin是生长激素促分泌素受体(GHS—R)的内源性配体，它的作用很广泛，不仅可以刺激垂体生长激素释放，还可以使食欲增强、胃肠运动加快、胃酸分泌增多，并参与能量代谢、心血管活动、免疫系统功能的调节。研究表明，自主神经系统和与应激反应有关的激素都会影响血浆酰化ghrelin的水平。
Uroco~in是CRF家族的一员，存在于中枢神经系统，身体其他部位也有分布。其中的Urocortin(UCN)与CRF.1型受体和CRF一2型受体都有高度的亲和力，与CRF.2型受体的亲和力是CRF.1型受体的40倍。CRF-2型受体在中枢和外周均有表达。以往研究表明，UCN可通过与CRF-2型受体结合发挥心血管作用，有可能用于治疗冠心病、高血压、充血性心衰、心肌梗死等心血管疾病¨。UCN还与应激反应有关。另有研究表明，UCN参与食欲降低、抑郁、摄食抑制等的发生，但其机制尚未明确。
本项研究表明，侧脑室注射UCN后，摄食量、胃排空速度均有显著抑制，血浆中酰化和非酰化ghrelin水平也有显著降低，而有活性的酰化ghrelin有增强食欲、加快胃肠运动、增加胃酸分泌的作用。可以推测：UCN使血浆中酰化和非酰化ghrelin水平降低，并导致摄食抑制、胃肠功能失调，后两者可能有一定的关系。
通过使用CRF.1型受体和CRF一2型受体拮抗剂，发现CRF一2型受体拮抗剂可修复由UCN导致的血浆中酰化和非酰化ghrelin水平降低和摄食抑制、胃肠功能失调等症状，但CRF一1型受体拮抗剂却不能。故推测：侧脑室注射UCN发挥以上作用可能是由cRF_2型受体介导的。
综上，可以得出结论：UCN经侧脑室注射后能与CRF一2型受体结合，从而抑制胃肠功能并降低血浆酰化和非酰化ghrelin水平。由于压力事件会引发机体的应激反应，而应激反应可使中枢神经系统对UCN的表达增强J，因此可以推测：压力事件导致的厌食症、胃肠功能失调等症状可能与UCN有关。
SCI SSCI AHCI