HPLC法测定复方藿香丸中和厚朴酚与厚朴酚的含量

发布时间：2020-01-02所属分类：医学论文浏览：1247次

摘 要： 摘要：目的：建立HPLC法同时测定复方藿香丸中和厚朴酚与厚朴酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色谱柱(4.6mm250mm，5m)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长294nm，检测柱温30℃。结果：和厚朴酚、厚朴酚的进样浓度分别

　　摘要：目的：建立HPLC法同时测定复方藿香丸中和厚朴酚与厚朴酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长294nm，检测柱温30℃。结果：和厚朴酚、厚朴酚的进样浓度分别在13.00~208.00g/L(r=0.99995)和26.23~419.68g/L(r=0.99996)呈良好线性关系;和厚朴酚、厚朴酚的平均回收率(n=6)分别为98.58%(RSD%=2.29)、101.29%(RSD%=1.75);5个批次复方藿香丸样品中和厚朴酚、厚朴酚的含量测定结果分别为3.41~12.26mg/袋、8.59~14.42mg/袋。结论：建立的HPLC法可用于复方藿香丸中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定。

　　关键词：复方藿香丸;厚朴酚;和厚朴酚;含量测定

　　复方藿香丸为萍乡市中医院的医院制剂，由广藿香、厚朴(姜制)、陈皮、紫苏叶、白芷、白术(炒)、姜半夏、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大枣等13味中药组成，具有解表化湿，理气和中之功效，主要用于外感风寒，内伤湿滞，头痛昏重，脘腹胀痛，呕吐泄泻，胃肠型感冒。厚朴是临床常用中药，来源于木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹叶厚朴MagnoliaoffinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具燥湿消痰，下气除满之功效[1]。处方中厚朴作为臣药，加强君药广藿香解表化湿的功效。其主要有效成分为和厚朴酚、厚朴酚[2-5]。研究表明，厚朴酚与和厚朴酚均有抗腹泻作用[6-7]。目前复方藿香丸收录于2007年版《江西省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准》，主要质控项目仅为“性状”“薄层鉴别”两个项目，尚未有复方藿香丸中活性成分的含量测定方法。随着国家对医院制剂标准的提高和规范化管理的加强[8]，为了更全面的对复方藿香丸进行质量控制，因此本文建立了复方藿香丸中厚朴的HPLC含量测定方法，以厚朴酚与和厚朴酚为指标性成分，以期为控制和提高复方藿香丸的质量提供科学依据。

　　1材料

　　1.1试药复方藿香丸(规格每袋9克)均由萍乡市中医院提供;厚朴酚(98.8%，批号110729-201513)、和厚朴酚(100%，批号110730-201614)对照品购于中国食品药品检定研究院;甲醇、乙腈(HPLC级，购于北京百灵威科技有限公司);水为娃哈哈水，其他试剂均为分析纯。

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　　1.2仪器Agilent1200高效液相色谱仪，包括Agilent1200柱温箱、DAD检测器、Agilent1200色谱工作站。ME-204(万分之一天平，梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司);电子分析天平CP225D(十万分之一，德国Satorius科学仪器有限公司);酸度计(德国Satorius科学仪器有限公司)。

　　2方法与结果

　　2.1溶液制备

　　2.1.1混合对照品储备液的制备分别精密称取和厚朴酚、厚朴酚对照品适量，置同一25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得含和厚朴酚520.00g/L、厚朴酚1049.20g/L的混合储备溶液。

　　2.1.2供试品溶液的制备取装量差异项下内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，称定重量，超声(500W，40KHz)处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.1.3阴性样品溶液的制备按工艺方法制备缺少厚朴的阴性样品，按“2.1.2”项下方法操作，制成阴性样品溶液，依法测定，结果表明：阴性样品的HPLC图谱中，无呈现与厚朴酚、和厚朴酚对照品保留时间相同的色谱峰，见图1。

　　2.2色谱条件色谱柱为Agilent5TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)为流动相，检测流速为1.0mL/min，波长294nm，柱温30℃，进样量10μL，在上述色谱条件下，和厚朴酚、厚朴酚与其他组分的色谱峰分离度良好。对照品、样品及阴性样品色谱图见图1。

　　2.3方法学考察

　　2.3.1线性关系考察精密吸取上述混合对照品储备液，加甲醇逐级稀释得系列标准溶液，含厚朴酚分别为26.23，52.46，104.92，209.84，419.68g/L;含和厚朴酚分别为13.00，26.00，52.00，104.00，208.00g/L。分别精密吸取上述对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，按“2.2”项下色谱条件测定，以对照品的进样浓度(g/L)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得厚朴酚回归方程：Y=13.94014X+6.27638，r=0.99996;和厚朴酚回归方程：Y=15.32088X+3.53886，r=0.99995。结果表明厚朴酚进样浓度在26.23~419.68g/L呈良好线性关系;和厚朴酚进样浓度在13.00~208.00g/L呈良好线性关系。

　　2.3.2精密度试验精密吸取混合对照品溶液(和厚朴酚52.00g/L、厚朴酚104.92g/L)10μL，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。和厚朴酚峰面积的RSD为0.52%;厚朴酚峰面积的RSD为0.43%。结果表明精密度良好。

　　2.3.3稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、10、12h精密吸取10μL进样，按“2.2”项下色谱条件，测定厚朴酚与和厚朴酚的峰面积，测得和厚朴酚峰面积的RSD为0.92%;厚朴酚峰面积的RSD为0.77%。结果表明供试品溶液在室温下12h内稳定。

　　2.3.4重复性试验取同一批号(20150402)样品六份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算和厚朴酚与厚朴酚的含量(mg/袋)。结果计算得和厚朴酚含量的RSD为1.82%;厚朴酚含量的RSD为0.84%;表明该方法重现性良好。

　　2.3.5加样回收率试验取已知含量(和厚朴酚：7.1565mg/袋;厚朴酚：14.4420mg/袋)的复方藿香丸样品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入适量和厚朴酚与厚朴酚混合对照储备液，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定含量，计算加样回收率(n=6)，结果表明和厚朴酚与厚朴酚的平均回收率分别为98.58%、101.29%，RSD分别为2.29%、1.75%，结果见表1-2。

　　2.3.6耐用性试验取同一批号(20170705)样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别采用Agilent5TC-C18(4.6mm×250mm，5μm)、SepaxAmethystC18-H(4.6mm×250mm，5μm)、WelchUltimateXB-C18(4.6mm×250mm，5μm)3种品牌的色谱柱，按“2.2”项下色谱条件测定，结果无明显差别。

　　2.4样品测定取不同批号复方藿香丸样品，按“2.1.2”项下供试品溶液的制备项下制备供试液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表3。

　　3讨论

　　3.1色谱条件的选择经DAD检测器扫描和厚朴酚、厚朴酚对照品，结果显示和厚朴酚的最大吸收波长为294nm，厚朴酚的最大吸收波长为292nm，综合考虑选择294m作为检测波长。在流动相的选择中，由于复方藿香丸中含十三味中药，成分复杂，本文尝试参考《中国药典》2015年版一部厚朴含量测定项下流动相甲醇-水(78∶22)，结果和厚朴酚的分离度达不到要求。后尝试乙腈-水(40∶60)、乙腈-0.1%磷酸(45∶55)，结果显示和厚朴酚的分离度均达不到要求。而甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)系统分离效果好，峰形最佳，故选择甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)为流动相。

　　3.2提取方法及时间的考察提取条件采用超声提取法分别考察了甲醇、50%甲醇、稀乙醇三种提取溶剂，结果表明甲醇提取效率最高。在此基础上，分别考察了超声和回流2种提取方式，结果超声与回流提取效率相当，故选用提取简单的超声提取方式。同时对甲醇溶液用量10、25、50mL，以及超声时间15、30，60min进行考察，最后确定采用甲醇超声(500W，40KHz)处理30min为宜。

　　3.3小结

　　从对5批复方藿香丸样品中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定结果来看，和厚朴酚与厚朴酚含量相差较大，提示厚朴原药材的质量存在差别，为避免由原药材引起中成药的疗效差异，保障人民用药的安全有效，因此有必要对厚朴进行质量控制。本文建立了同时测定复方藿香丸中和厚朴酚与厚朴酚含量的HPLC方法，经方法学验证，该方法准确、快速，操作简便，专属性强，重现性好，可用于复方藿香丸的质量评价。

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